avkАрхивъ внутренней медициныThe Russian Archives of Internal Medicine2226-67042411-6564“SINAPS” LLC10.20514/2226-6704-2019-9-6-475-482avk-987Research ArticleРАЗБОР КЛИНИЧЕСКИХ СЛУЧАЕВANALYSIS OF CLINICAL CASESВыявление синдрома Жильбера методом пиросеквенирования у пациентов в реальной клинической практикеDiagnosis of gilbert’s syndrome via pyrosequencing in clinical practiceМельниковаЛ. И.MelnikovaL. I.

Москва

Moscow

ИльченкоЛ. Ю.IlchenkoL. Yu.

Ильченко Людмила Юрьевна

Lyudmila Yu. Ilchenko

Moscow

 

ilchenko-med@yandex.ruДунаеваЕ. А.DunaevaE. A.

Москва

Moscow

КозицынаМ. В.KozitsynaM. V.

Москва

Moscow

ДрибноходоваО. П.DribnokhodovaO. P.

Москва

Moscow

МироновК. О.MironovK. O.

Москва

Moscow

ФГБУЗ «Клиническая больница № 85» ФМБА РоссииРоссияFederal State Budgetary Healthcare Institution Clinical Hospital No. 85, FMBA of RussiaRussian FederationФГБУЗ «Клиническая больница № 85» ФМБА России; ФГБНУ Федеральный Научный центр исследования и разработки иммунобиологических препаратов им. М.П. Чумакова, РАН; ФГБОУ ВО «Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова» Минздрава РоссииРоссияFederal State Budgetary Healthcare Institution Clinical Hospital No. 85, FMBA of Russia; Federal State Budgetary Scientific Institution Chumakov Federal Scientific Center for Research and Development of Immune-and- Biological Products of Russian Academy of Sciences; Federal State Budgetary Educational Institution of H igher Education Russian National Research Medical University named after N.I. Pirogov, Ministry of Health of RussiaRussian FederationФБУН «Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии» РоспотребнадзораРоссияFederal Budgetary Scientific Institution Central Research Institute of Epidemiology, RospotrebnadzorRussian Federation20193011201996475482Copyright © Мельникова Л.И., Ильченко Л.Ю., Дунаева Е.А., Козицына М.В., Дрибноходова О.П., Миронов К.О., 20192019Мельникова Л.И., Ильченко Л.Ю., Дунаева Е.А., Козицына М.В., Дрибноходова О.П., Миронов К.О.Melnikova L.I., Ilchenko L.Y., Dunaeva E.A., Kozitsyna M.V., Dribnokhodova O.P., Mironov K.O.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.medarhive.ru/jour/article/view/987Актуальность

Актуальность. Синдром Жильбера (СЖ) — заболевание с аутосомно-рецессивным типом наследования, обусловленное либо нарушением уровня экспрессии гена UGT1A1, кодирующего изоформу фермента уридиндифосфатглюкуронилтрансферазы (УДФ-ГТА1), либо структурными модификациями УДФ-ГТА1. СЖ характеризуется неконъюгированной гипербилирубинемией; возможны нарушения метаболизма лекарств, развитие межлекарственных взаимодействий. Для диагностики СЖ с помощью молекулярно-биологических методов проводят определение однонуклеотидных полиморфизмов (ОП). Данные о распространенности ОП, касающиеся СЖ, в России малочисленны.

Цель исследования

Цель исследования: детекция генетического варианта (ТА)5/6/7/8 (rs8175347) в гене UGT1A1 (синдром Жильбера) методом пиросеквенирования у пациентов в амбулаторной практике.

Материал и методы

Материал и методы: обследовано 200 пациентов амбулаторной практики. Из них: мужчин — 107 (53,5%), женщин — 93(46,5%) в возрасте от 15 до 86 лет; преобладали пациенты от 30 лет и старше — 175 (87,5%). Детекция генетического варианта (ТА)5/6/7/8 (rs8175347) в гене UGT1A1 (СЖ) осуществлялась методом пиросеквенирования с применением системы генетического анализа серии PyroMark «АмплиСенс® Пироскрин UGT1A1» (производство ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора, Россия). В качестве сравнения использовали секвенирование по F. Sanger.

Результаты

Результаты: нормальный генотип (ТА)6/(ТА)6 установлен у 71 (35,5%) пациента, генотип (ТА)6/(ТА)7 — у 81 (40,5%) (гетерозиготное состояние) и (ТА)7/(ТА)7 — у 48 (24%) (гомозиготное состояние). Редкие генотипы (ТА)5/(ТА)6, (ТА)5/(ТА)7, (ТА)6/(ТА)8 и (ТА)7/(ТА)8 обнаружены не были. Результаты определения генотипов (ТА)6/(ТА)7 в гомо- и гетерогенном состоянии методом пиросеквенирования и при секвенировании по Сэнгеру совпадали во всех случаях. У 30 из 48 пациентов СЖ был диагностирован впервые, в половине случаев это лица старшей возрастной группы. Ни у одного из них не наблюдалось повышения содержания билирубина.

Заключение

Заключение: частота выявление СЖ у амбулаторных пациентов составила 24%. Метод пиросеквенирования позволяет выявить различные варианты полиморфизма (ТА)5/6/7/8 в гомо- и гетерозиготном состоянии. Применение набора «АмплиСенс® Пироскрин UGT1A1» в клинической практике может быть использовано для диагностики СЖ и оценки побочных эффектов при назначении лекарств.

Relevance

Relevance. Gilbert’s syndrome (GS) is a disease with an autosomal recessive type of inheritance caused by either impaired expression of the UGT1A1 gene, which encodes the isoform of the uridine-5-diphosphate glucuronosyltransferase (UDP-GTA1), or structural modifications of UDP-GTA1. GS is characterized by unconjugated hyperbilirubinemia; drug metabolism disorders and the development of drug-drug interactions. For diagnosis of GS, molecular biological methods are used to determine single nucleotide polymorphisms (SNP). Data on the prevalence of SNP related to GS in Russia are scarce. Study objective: Detection of genetic variant (TA)5/6/7/8 (rs8175347) in the UGT1A1 gene (Gilbert’s syndrome) by pyrosequencing in outpatient practice.

Material and methods

Material and methods: 200 outpatients were examined. Of whom: men — 107 (53.5 %), women — 93 (46.5 %) aged 15 to 86 years; patients from 30 years and older formed the majority — 175 (87.5 %). Detection of the genetic variant (TA)5/6/7/8 (rs8175347) in the UGT1A1 gene (GS) was carried out by pyrosequencing using the PyroMark AmpliSens® Pyroscreen UGT1A1 genetic analysis system (manufactured by the Federal Budgetary Scientific Institution Central Research Institute of Epidemiology of Rospotrebnadzor, Russia). For comparison, sequencing according to F. Sanger was used.

Results

Results: Normal (TA)6/(TA)6 genotype was found in 71 (35.5 %) patients, (TA)6/(TA)7 genotype was found in 81 (40.5 %) (heterozygous status) and (TA)7/(TA)7 genotype — in 48 (24 %) (homozygous status). Rare (TA)5/(TA)6, (TA)5/(TA)7, (TA)6/(TA)8 and (TA)7/(TA)8 genotypes were not found. The results of the determination of (TA)6/(TA)7 genotypes in the homo- and heterogeneous status by pyrosequencing and Sanger sequencing were the same in all cases. In 30 out of 48 patients, GS was newly diagnosed, and in half of the cases these patients were persons of the older group. None of them showed an increase in bilirubin level.

Conclusion

Conclusion: The incidence of GS in outpatients was 24 %. Pyrosequencing allows us to identify various variants of the (TA)5/6/7/8 polymorphism in the homo- and heterozygous status. AmpliSens® Pyroscreen UGT1A1 kit can be used in clinical practice to diagnose GS and to assess side effects of prescribed drugs.

синдром Жильберагипербилирубинемияуридиндифосфат-глюкуронилтрансфераза 1А1 (УГТ1А1)пиросеквенированиеGilbert's syndromehyperbilirubinemiauridine-5-diphosphate glucuronosyltransferase 1A1 (UDP-GTA1)pyrosequencing Conflict of interestReferencesGilbert A.N., Lereboullet P. La cholemie simple familiale. Semaine Medicale. 1901; 21: 241-3.Gilbert A.N., Lereboullet P. La cholemie simple familiale. Semaine Medicale. 1901; 21: 241-3.Ильченко Л.Ю., Дроздов В.Н., Шулятьев И.С. и др. Синдром Жильбера: клинико-генетическое исследование. Тер. архив. 2006; 2: 48-2.Ilchenko L.Yu., Drozdov V.N., Shulyat'ev I.S. et al. Gilbert's syndrome: clinical and genetic investigation. Ter. arkh. 2006; 2: 48-2. [In Russian].Wagner K.H., Shiels R.G., Llang C.A. et al. Diagnostic criteria and contributors to Gilbert's syndrome. Crit. Rev. Clin. Lab. Sci. 2018;55(2):129-39. doi: 10.1080/10408363.2018.1428526.Wagner K.H., Shiels R.G., Llang C.A. et al. Diagnostic criteria and contributors to Gilbert's syndrome. Crit. Rev. Clin. Lab. Sci. 2018;55(2):129-39. doi: 10.1080/10408363.2018.1428526.Innocenti F., Ratain M.J. Irinotecan treatment in cancer patients with UGT1A1 polymorphisms. Oncology (Williston Park, N.Y.). 2003; 17(5): 52-5.Innocenti F., Ratain M.J. Irinotecan treatment in cancer patients with UGT1A1 polymorphisms. Oncology (Williston Park, N.Y.). 2003; 17(5): 52-5.Farago B., Melegh B. Gilbert's syndrome. Orv. Hetil. 2008; 149(27): 1277-2. doi: 10.1556/OH.2008.28381.Farago B., Melegh B. Gilbert's syndrome. Orv. Hetil. 2008; 149(27): 1277-2. doi: 10.1556/OH.2008.28381.Рейзис А.Р, Хохлова О.Н., Никитина Т.С. Синдром Жильбера: современные воззрения, исходы и терапия. Доктор Ру. 2012; 3(71): 42-5.Reyzis A.R., Khokhlova O.N., Nikitina T.S. Gilbert's Syndrome: Current Insights, Outcomes and Therapies. Doctor Ru. 2012; 3(71): 42-5. [In Russian].Johnson A.D., Kavousi M., Smith A.V, et al. Genome-wide association meta-analysis for total serum bilirubin levels. Human Molecular Genetics. 2009; 18(14): 2700-10. doi: 10.1093/hmg/ddp202.Johnson A.D., Kavousi M., Smith A.V, et al. Genome-wide association meta-analysis for total serum bilirubin levels. Human Molecular Genetics. 2009; 18(14): 2700-10. doi: 10.1093/hmg/ddp202.Muraca M., Fevery J. Influence of sex and sex steroids on bilirubin-uridinediphosphateglucuronosyltransferase activity of rat liver. Gastroenterology. 1984; 87: 308-3.Muraca M., Fevery J. Influence of sex and sex steroids on bilirubin-uridinediphosphateglucuronosyltransferase activity of rat liver. Gastroenterology. 1984; 87: 308-3.Lee J.S., Wang J., Martin M. et al. Genetic variation in UGT1A1 typical of Gilbert syndrome is associated with unconjugated hyperbilirubinemia in patients receiving tocilizumab. Pharmacogenet. Genomics. 2011; 21(7): 365-4. doi: 10.1097/FPC.0b013e32834592fe.Lee J.S., Wang J., Martin M. et al. Genetic variation in UGT1A1 typical of Gilbert syndrome is associated with unconjugated hyperbilirubinemia in patients receiving tocilizumab. Pharmacogenet. Genomics. 2011; 21(7): 365-4. doi: 10.1097/FPC.0b013e32834592fe.Mackenzie P.I., Owens I.S., Burchell B. et al. The UDP glycosyltransferase gene superfamily: recommended nomenclature update based on evolutionary divergence. Pharmacogenetics. 1997; 7(4): 255-69. doi:10.1097/00008571-199708000-00001.Mackenzie P.I., Owens I.S., Burchell B. et al. The UDP glycosyltransferase gene superfamily: recommended nomenclature update based on evolutionary divergence. Pharmacogenetics. 1997; 7(4): 255-69. doi:10.1097/00008571-199708000-00001.Matsui K., Maruo Y., Sato H. et al. Combined effect of regulatory polymorphisms on transcription of UGT1A1 as a cause of Gilbert syndrome. BMC Gastroenterology. 2010; 10: 57. doi: 10.1186/1471-230X-10-57,Matsui K., Maruo Y., Sato H. et al. Combined effect of regulatory polymorphisms on transcription of UGT1A1 as a cause of Gilbert syndrome. BMC Gastroenterology. 2010; 10: 57. doi: 10.1186/1471-230X-10-57,Sugatani J. Function, genetic polymorphism, and transcriptional regulation of human UDP-glucuronosyltransferase (UGT) 1A1. Drug Metab. Pharmacokinet. 2013; 28(2): 83-2.Sugatani J. Function, genetic polymorphism, and transcriptional regulation of human UDP-glucuronosyltransferase (UGT) 1A1. Drug Metab. Pharmacokinet. 2013; 28(2): 83-2.Герок В., Блюм Х.Е. Заболевания печени и желчевыделительной системы. М.: «МЕДпресс-информ». 2009; 199 с.Gerok V., Blum H.E. Diseases of the liver and bile excretory system. German transl. M.: Medpress-inform. 2009; 199 р. [In Russian].Bock K.W., Gschaidmeier H., Heel H. et al. Functions and transcriptional regulation of PAH-inducible human UDP-glucuronosyltransferases. Drug Metab. Rev. 1999; 31(2): 411-22. doi: 10.1081/DMR-100101927.Bock K.W., Gschaidmeier H., Heel H. et al. Functions and transcriptional regulation of PAH-inducible human UDP-glucuronosyltransferases. Drug Metab. Rev. 1999; 31(2): 411-22. doi: 10.1081/DMR-100101927.Sangеr F., Nicklen S., Coulson A.R. DNA sequencing with chainterminating ingibtors. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1977; 74(12): 5463-7. DOI: 10.1073/pnas.74.12.5463.Sangеr F., Nicklen S., Coulson A.R. DNA sequencing with chainterminating ingibtors. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1977; 74(12): 5463-7. DOI: 10.1073/pnas.74.12.5463.Nyren P. The History of Pyrosequencing. Methods Mol. Biol. 2015; 1315: 3-15. doi: 10.1007/978-1-4939-2715-9_1.Nyren P. The History of Pyrosequencing. Methods Mol. Biol. 2015; 1315: 3-15. doi: 10.1007/978-1-4939-2715-9_1.Дрибнохотова О.П., Миронов К.О., Дунаева Е.А. и др. Определение полиморфизма (ТА)6(ТА)7 в гене UGT1A1 методом пиросекве-нирования. Молекулярная медицина. 2014; 2: 38-40.Dribnokhodova O.P., Moronov K.O., Dunaeva E.A. et al. A pyrose-quencing-based for the detextion of UGT1A1 (TA)6(TA)7 polymorphism. Molecular medicine. 2014; 2: 38-40. [In Russian].Волков А.Н., Цуркан Е.В. Мутация гена UGT1A1 как маркер высокого риска возникновения синдрома Жильбера: научноприкладные аспекты. Анализ риска здоровью. 2019; 2: 123-9. doi: 10.21668/health.risk/2019.2.14.Volkov A.N., Tsurkan E.V. UGT1A1 gene mutation as a marker indicating there is a high risk of Gilbert's syndrome: theoretical and applied aspects. Health risk analysis. 2019; 2: 123-9. [In Russian]. doi: 10.21668/health.risk/2019.2.14.Колюбаева С.Н., Кулагина К.О, Петрова И.С., Криворучко А.Б., Иванов А.М. Молекулярно-генетическая диагностика синдрома Жильбера методом пиросеквенирования. Поликлиника. 2016; 1(3): 4-6.Kolubaeva S.N., Kulagina K.O., Petrova I.S., Krivoruchko A.B., Ivanov A.M. Diagnostics of Gilbert's syndrome by pyrosequencing. Polyclinic. 2016; 1(3): 4-6. [In Russian].Дубровина Г.М., Ботвиньев О.К., Колотилина А.И. Сочетание синдрома Жильбера с заболеваниями желудочно-кишечного тракта. Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. 2014; 3: 13-1.Dubrovina G.M, Botvin'yev O.K., Kolotilina A.I. Combination of Gilbert's syndrome and gastrointestinal diseases. Russian J. Gastroenterol., Hepatol., Coloproctol. 2014; 3: 13-1. [In Russian].Dutt M.K., Murphy G.M., Thompson R.P. Unconjugated bilirubin in human bile: the nucleating factor in cholesterol cholelithiasis? J. Clin. Pathol. 2003; 56: 596-8. doi: 10.1136/jcp.56.8.596.Dutt M.K., Murphy G.M., Thompson R.P. Unconjugated bilirubin in human bile: the nucleating factor in cholesterol cholelithiasis? J. Clin. Pathol. 2003; 56: 596-8. doi: 10.1136/jcp.56.8.596.Tsezou A., Tzetis M.,Giannatou E. et al. Gilbert syndrome as a predisposing factor for cholelithiasis risk in the Greek adult population. Genet. Test. Mol. Biomarkers. 2009; 13(1): 143-6. doi: 10.1089/gtmb.2008.0095.Tsezou A., Tzetis M.,Giannatou E. et al. Gilbert syndrome as a predisposing factor for cholelithiasis risk in the Greek adult population. Genet. Test. Mol. Biomarkers. 2009; 13(1): 143-6. doi: 10.1089/gtmb.2008.0095.Buch S., Schafmayer C., Volzke H. et al. Loci from a genome-wide analyses of bilirubin levels are associated with gallstone risk and composition. Gastroenterology. 2010; 139(6): 1942-1. doi: 10.1053/j.gastro.2010.09.003.Buch S., Schafmayer C., Volzke H. et al. Loci from a genome-wide analyses of bilirubin levels are associated with gallstone risk and composition. Gastroenterology. 2010; 139(6): 1942-1. doi: 10.1053/j.gastro.2010.09.003.Radlovic N., Ristic D., Brdar R. Association of hereditary elliptocytosis and Gilbert's syndrome as the cause of biliary calculosis: case report. Srpski arhiv za celokupno lekarstvo. 2011; 139(5-6): 386-9.Radlovic N., Ristic D., Brdar R. Association of hereditary elliptocytosis and Gilbert's syndrome as the cause of biliary calculosis: case report. Srpski arhiv za celokupno lekarstvo. 2011; 139(5-6): 386-9.Horsfall L.J., Nazareth I., Pereira S.P. et al. Gilbert's syndrome and the risk of death: a population-based cohort study. J. Gastroenterol. Hepatol. 2013; 28(10): 1643-7. doi: 10.1111/jgh.12279.Horsfall L.J., Nazareth I., Pereira S.P. et al. Gilbert's syndrome and the risk of death: a population-based cohort study. J. Gastroenterol. Hepatol. 2013; 28(10): 1643-7. doi: 10.1111/jgh.12279.Ginsburg G.S., McCarthy J.J. Personalized medicine: Revolutionizing drug discovery and patient care. Trends Biotechnol. 2001; 19: 491-6.Ginsburg G.S., McCarthy J.J. Personalized medicine: Revolutionizing drug discovery and patient care. Trends Biotechnol. 2001; 19: 491-6.Deterding K., Grungreiff K., Lankisch T.O. et al. Gilbert's syndrome and antiviral therapy of hepatitis C. Ann. Hepatol. 2009; 8(3): 246-50.Deterding K., Grungreiff K., Lankisch T.O. et al. Gilbert's syndrome and antiviral therapy of hepatitis C. Ann. Hepatol. 2009; 8(3): 246-50.McDonald G.B., Evans A.T., McCune J.S. et al. Mortality outcomes after busulfan-containing conditioning treatment and haemopoietic cell transplantation in patients with Gilbert's syndrome: a retrospective cohort study. Lancet Haematol. 2016; 3(11): e516-e525. doi: 10.1016/S2352-3026(16)30149-1.McDonald G.B., Evans A.T., McCune J.S. et al. Mortality outcomes after busulfan-containing conditioning treatment and haemopoietic cell transplantation in patients with Gilbert's syndrome: a retrospective cohort study. Lancet Haematol. 2016; 3(11): e516-e525. doi: 10.1016/S2352-3026(16)30149-1.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.